問題

原因

解決方案

細胞生長緩慢

生長培養(yǎng)基使用不當

按照生產(chǎn)商的建議，使用相應的預熱生長培養(yǎng)基。

生長培養(yǎng)基中血清質(zhì)量差

使用其他批次血清。

傳代操作不當

按照生產(chǎn)商的建議消化時間及傳代比例進行操作。

換液過于頻繁

降低換液頻率，參考生產(chǎn)商推薦的換液頻率。

細胞傳代次數(shù)過多

使用傳代次數(shù)較少的健康細胞。

細胞生長超過匯合狀態(tài)

哺乳動物細胞傳代應在細胞處于對數(shù)期、未達到匯合狀態(tài)時進行，建議細胞密度達 80-90%傳代。

細胞被支原體污染

將細胞、培養(yǎng)基和試劑丟棄；新取一只凍存細胞，并且使用新的培養(yǎng)基和試劑。

細胞復蘇存活率低

細胞凍存不當

新取一只凍存細胞，并儲存在液氮中。將細胞儲存在液氮中，直至復蘇。

自行制備的凍存細胞無活性

將細胞按照生產(chǎn)商推薦的密度凍存。

制備凍存細胞時使用傳代次數(shù)少的細胞。

嚴格按照生產(chǎn)商推薦的操作程序凍存細胞。請注意本手冊推薦的冷凍程序是凍存細胞的一般流程，只能作為指導原則使用。

新取一只凍存細胞。

細胞復蘇方法不當

嚴格按照生產(chǎn)商推薦的操作程序復蘇細胞。請注意本手冊推薦的解凍程序是復蘇細胞的一般流程，只能作為指導原則使用。

確保冷凍細胞解凍迅速，接種前用預熱的生長培養(yǎng)基緩慢稀釋細胞。

復蘇培養(yǎng)基使用不當

使用生產(chǎn)商推薦的培養(yǎng)基。確保培養(yǎng)基使用前已經(jīng)預熱。

細胞稀釋過度

按照生產(chǎn)商的建議，將解凍后的細胞??密度接種，以改善復蘇效果。

處理細胞時動作不夠輕柔

凍存和復蘇過程對大多數(shù)細胞都會造成不利影 響。不要通過渦旋振蕩或者用力敲打培養(yǎng)瓶的方法使細胞脫落(培養(yǎng)昆蟲細胞時除外)，也不要高速離心細胞。

凍存液中所用保護劑在儲存過程中未避光

如果未避光儲存，凍存保護劑會轉(zhuǎn)變?yōu)閷毎卸拘缘奈镔|(zhì)；新取一只凍存保護劑，重新凍存細胞。